Actividad amebistática de dos desinfectantes de uso hospitalario sobre cepas de Acanthamoeba spp. de diferente origen
Amoebistatic activity of two hospital-use disinfectants against Acanthamoeba spp. strains of different origins
Loriana Tomassini¹*, Cecilia Diego², Viviana Rosa Randazzo²*
Cátedra de Parasitología Humana, Departamento de Química y Bioquímica, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad Nacional de Mar del Plata. Córdoba 1737, Mar del Plata (7600), Buenos Aires, Argentina.
Cátedra Microbiología y Parasitología, Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia, Universidad Nacional del Sur, Bahía Blanca, Buenos Aires, Argentina.
*Correspondencia: ltomassini@mdp.edu.ar, viviana.randazzo@uns.edu.ar
ARK CAICYT: https://id.caicyt.gov.ar/ark:/s23139862/xrj6ac4fu
RESUMEN: Acanthamoeba spp. son amebas de vida libre ampliamente distribuidas en el ambiente y capaces de persistir en entornos hospitalarios gracias a la resistencia de sus quistes frente a condiciones adversas. La eficacia de los desinfectantes utilizados habitualmente para su control continúa siendo motivo de estudio debido a la variabilidad observada entre cepas y compuestos. El objetivo del presente estudio fue evaluar la actividad amebistática de soluciones de cloro y de cloruro dodecildimetilamonio sobre tres cepas de Acanthamoeba spp. de diferente origen. Para la experiencia se utilizaron una cepa de referencia (ATCC 30461: Acanthamoeba polyphaga), una cepa hospitalaria aislada de un centro de salud y una cepa ambiental proveniente de un humedal continental, ambos de la ciudad de Mar del Plata. Se evaluaron distintas concentraciones de cloro (24, 36, 48 y 60 ppm) y cloruro dodecildimetilamonio al 1.6%. Tras diferentes tiempos de exposición, los quistes fueron sembrados en agar no nutritivo con Escherichia coli y se registró la presencia o ausencia de crecimiento amebiano. Los ensayos se realizaron por triplicado. Las soluciones de cloro mostraron una actividad limitada frente a las tres cepas evaluadas, requiriéndose concentraciones elevadas y tiempos prolongados de exposición para inhibir el crecimiento. En contraste, el cloruro dodecildimetilamonio presentó una mayor actividad amebistática, logrando inhibición en las tres cepas analizadas. La cepa hospitalaria fue la más susceptible frente a ambos desinfectantes. La actividad amebistática fue inferida por ausencia de crecimiento en cultivo, sin ensayos de viabilidad quística específicos. Los resultados evidenciaron una respuesta diferencial de las cepas de Acanthamoeba spp. frente a los desinfectantes evaluados sugiriendo una mayor actividad amebistática del cloruro dodecildimetilamonio respecto de las soluciones de cloro. Estos hallazgos contribuyeron con información relevante para el control ambiental de Acanthamoeba spp. en ámbitos sanitarios resaltando la importancia de considerar la variabilidad entre aislamientos de distinto origen.
Palabras clave: Acanthamoeba spp., amebas de vida libre, desinfectantes, actividad amebistática, control ambiental.
ABSTRACT: Acanthamoeba spp. are free-living amoebae widely distributed in the environment and capable of persisting in hospital settings due to the resistance of their cysts to adverse conditions. The effectiveness of disinfectants routinely used for their control remains under investigation because of the variability observed among strains and compounds. To evaluate the amoebistatic activity of chlorine solutions and dodecyldimethylammonium chloride against three Acanthamoeba spp. strains of different origins; a reference strain (ATCC 30461, Acanthamoeba polyphaga), a hospital isolate recovered from a healthcare facility, and an environmental isolate obtained from a continental wetland were used. Different concentrations of chlorine (24, 36, 48, and 60 ppm) and 1.6% dodecyldimethylammonium chloride were evaluated. After different exposure times, cysts were inoculated onto non-nutrient agar plates seeded with Escherichia coli, and the presence or absence of amoebic growth was recorded. All assays were performed in triplicate. Chlorine solutions showed limited activity against the three strains evaluated, requiring high concentrations and prolonged exposure times to inhibit growth. In contrast, dodecyldimethylammonium chloride exhibited greater amoebistatic activity, achieving growth inhibition in all strains analysed. The hospital strain was the most susceptible to both disinfectants. Amoebistatic activity was inferred from absence of growth in culture, without specific cyst viability assays. The results demonstrate a differential response of Acanthamoeba spp. strains to the disinfectants evaluated and suggest greater amoebistatic activity of dodecyldimethylammonium chloride compared with chlorine solutions. These findings provide relevant information for the environmental control of Acanthamoeba spp. in healthcare settings and highlight the importance of considering variability among isolates of different origins.
Keywords: Acanthamoeba spp., free-living amoebae, disinfectants, amoebistatic activity, environmental control.
Citación: Tomassini, L., Diego, C., y Randazzo, V. R. (2026). Actividad amebistática de dos desinfectantes de uso hospitalario sobre cepas de Acanthamoeba spp. de diferente origen. Revista Argentina De Parasitología, 15(2), 5–12.
INTRODUCCIÓN
Acanthamoeba spp. es uno de los protozoos ambientales más prevalentes, con distribución cosmopolita y capacidad de colonizar tanto ambientes naturales como hábitats humanos, incluyendo instalaciones sanitarias (Khan, 2006; Schuster y Visvesvara, 2004). Sus aspectos biológicos y epidemiológicos generales, incluyendo el ciclo de vida, los estadios evolutivos y la resistencia de los quistes a condiciones ambientales extremas, han sido abordados previamente (Tomassini et al., 2022; Tomassini y Randazzo, 2025).
Desde el descubrimiento de Acanthamoeba como agente causal de enfermedad (queratitis amebiana, encefalitis amebiana granulomatosa e infecciones diseminadas) se ha testeado la actividad amebicida de varios compuestos, con el fin de aplicarlos al tratamiento de las infecciones causadas por amebas o bien para utilizarlos como desinfectantes ambientales, tanto sobre trofozoítos como sobre quistes (Castrillón y Orozco, 2013; Gertiser, 2015). Su presencia en el ámbito hospitalario constituye un riesgo epidemiológico que ha comenzado a recibir atención creciente en la literatura, y que enfatiza la necesidad de que los Comités de Infecciones Hospitalarias incorporen a estos protozoos en sus estrategias de vigilancia, dirigiendo esfuerzos hacia la identificación de agentes biocidas eficaces (Bullé et al., 2020; Carlesso et al., 2010; Tomassini et al., 2022).
Varios agentes quimioterapéuticos, extractos naturales y compuestos químicos se han testeado in vitro para determinar su efecto sobre especies de Acanthamoeba. Entre ellos se citan agentes químicos como las biguanidas, detergentes catiónicos y antifúngicos (Burger et al., 1994; Khan, 2006) y desinfectantes ambientales tales como cloro y sustancias halógenas (De Jonckheere y Van de Voorde, 1976; Diego, 2023; Gertiser, 2015; Mogoa et al., 2010). Los resultados han sido variables, y algunos cuestionables, ya que las cepas presentan comportamientos distintos dependiendo de las condiciones de cultivo, de su virulencia o de su capacidad de crecimiento. En muchos casos el inconveniente de estas experiencias fue la falta de correlación entre los resultados obtenidos in vitro y los esperados in vivo. Esta variabilidad ha sido atribuida, entre otros factores, a diferencias en la estructura de la pared quística, el genotipo y el origen de los aislamientos, lo que dificulta la extrapolación de los resultados entre estudios.
Las soluciones cloradas constituyen uno de los desinfectantes más utilizados a nivel mundial debido a su bajo costo, disponibilidad y amplio espectro antimicrobiano. No obstante, diversos estudios han demostrado que los quistes de Acanthamoeba spp. presentan una elevada resistencia frente a este tipo de compuestos. De Jonckheere y Van de Voorde (1976) observaron que las concentraciones de cloro habitualmente empleadas en procesos de desinfección resultan insuficientes para lograr una inactivación efectiva de los quistes, mientras que Mogoa et al. (2010) describieron alteraciones celulares inducidas por la cloración sin evidenciar una eliminación completa de estas formas de resistencia. En conjunto, la evidencia disponible sugiere que la eficacia de las soluciones cloradas frente a quistes de Acanthamoeba spp. es limitada y dependiente tanto de la concentración utilizada como del tiempo de exposición.
En contraste, los detergentes catiónicos y compuestos de amonio cuaternario han demostrado una actividad antimicrobiana significativa frente a diversos microorganismos de importancia sanitaria. Sin embargo, la información disponible sobre su actividad específica frente a quistes de Acanthamoeba spp. continúa siendo escasa, particularmente para compuestos utilizados de manera rutinaria en instituciones hospitalarias, y son limitados los estudios que comparan la respuesta de cepas de distinto origen —ambiental, hospitalario y de referencia— frente a estos agentes biocidas. En este contexto, resulta relevante determinar la eficacia de los desinfectantes utilizados rutinariamente en instituciones sanitarias frente a los quistes de Acanthamoeba spp., estructura que representa el mayor desafío para los protocolos de higiene hospitalaria dado su reconocida resistencia a agentes antimicrobianos (Gabriel y Panaligan, 2020; Osato et al., 1991; Turner et al., 2000).
El objetivo de la presente contribución fue evaluar la inhibición del crecimiento (actividad amebistática) de soluciones de cloro y cloruro dodecildimetilamonio, utilizadas rutinariamente en la higiene hospitalaria, sobre tres cepas de Acanthamoeba spp. positivo cuando se observaron trofozoítos y/o quistes de Acanthamoeba spp. Las concentraciones de cloro que inhibieron el desarrollo de las cepas en ANN se consideraron con actividad amebistática positiva (cualitativo). Es decir que la actividad amebistática fue inferida a partir de la ausencia de crecimiento posterior en cultivo y no mediante ensayos específicos de viabilidad quística.
MATERIALES Y MÉTODOS
Se utilizaron tres cepas de Acanthamoeba spp. a saber: cepa A: Acanthamoeba polyphaga(ATCC 30461); cepa B aislada en un hospital público (Tomassini et al., 2022) y cepa C aislada de un humedal continental, provenientes B y C del partido de General Pueyrredón, Buenos Aires, Argentina.
Evaluación de susceptibilidad
Para garantizar la obtención de quistes maduros las muestras con los aislamientos de las respectivas cepas se sembraron en medio MYAS (Maltextract-Yeastextract-Amoebae Saline: extracto de maltosa 0.01%, extracto de levadura 0.01% en solución de Page) con un inóculo de E. coli, mantenido por un mes previo a los ensayos.
Ensayo A - Detección de la acción biocida de las soluciones de cloro
Se prepararon soluciones de cloro comercial, agua-lavandina (55g/l), en concentraciones crecientes, 24; 36; 48 y 60 partes por millón (ppm), en agua desioniza-da estéril. Se prepararon diferentes concentraciones de soluciones cloradas dado que para desinfectar la concentración depende de la superficie y el protocolo a utilizar. Las concentraciones seleccionadas abarcan un rango creciente que permite evaluar posibles diferencias de susceptibilidad entre cepas. Para ello se usaron botellas de vidrio estériles con las distintas soluciones de cloro, a las que se les inocularon 1 ml de una suspensión de 1.3 x 105 quistes/ml en un volumen final de 125 ml. En cada caso, los quistes de las cepas A, B y C de Acanthamoeba fueron contados en cámara de Neubauer. Cada cepa fue evaluada por triplicado.
Para cada concentración, y a distintos intervalos de tiempo (30 min, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12 y 24 h), se tomaron alícuotas de aproximadamente 11 ml en un tubo estéril con un cristal de tiosulfato para detener la acción del cloro, previa homogenización. Se contrastó con control sin cloro.
Estos tubos se centrifugaron durante 15 min a 2000 rpm, se descartó el sobrenadante reteniendo 1 ml aproximadamente, en el que se resuspendió el pellet que se utilizó posteriormente para la siembra.
Siembra. En placas de Petri estériles se preparó agar no nutritivo al 1.5 % (AAN Britania); estas placas se inocularon con 500 μl de solución de PAGE que contie-ne cepa ATCC de E. coli (ATCC 25922) en crecimiento exponencial. Posteriormente se adicionó 100 μl del pellet. Se procedió a incubar todas las placas a 37 °C. Las placas fueron monitoreadas durante 7 días. Para determinar la existencia de crecimiento parasitario, se realizaron observaciones con un microscopio óptico (entre cubreobjetos y portaobjetos) en 100 y 400 aumentos, cada 24 horas. El cultivo fue considerado positivo cuando se observaron trofozoítos y/o quistes de Acanthamoeba spp.
Las concentraciones de cloro que inhibieron el desarrollo de las cepas en ANN se consideraron con actividad amebistática positiva (cualitativo). Es decir que la actividad amebistática fue inferida a partir de la ausencia de crecimiento posterior en cultivo y no mediante ensayos específicos de viabilidad quística.
Ensayo B - Detección de la acción amebistática del cloruro dodecildimetilamonio (detergente catiónico)
Se prepararon soluciones de cloruro dodecildimetilamonio de uso hospitalario en agua desionizada estéril al 1.6%. Para ello se usaron botellas de vidrio estériles a las que se les inoculó 1 ml de una suspensión de 1.3 x 105 quistes/ml en un volumen final de 100 ml.
Los quistes de Acanthamoeba correspondientes a las cepas A, B y C fueron contados en cámara de Neubauer. A distintos intervalos de tiempo (30 min; 1, 3, 6 y 24 h) se tomaron alícuotas de aproximadamente 11 ml en un tubo estéril previa homogenización. Se contrastó con control sin detergente. Cada cepa se evaluó por triplicado.
Los tubos se centrifugaron durante 15 min a 2000 rpm, se descartó el sobrenadante reteniendo 1 ml aproximadamente, en el que se resuspendió el pellet que se utilizó para la siembra. Cabe destacar que no se incluyó un neutralizador específico para el cloruro dodecildimetilamonio previo a la siembra en agar no nutritivo.
Siembra. Se realizó en ANN, tal lo indicado para la siembra del Ensayo A.
Se determinó el tiempo en el que el detergente catiónico inhibió el desarrollo de las cepas en ANN considerándose dicho tiempo de exposición como el necesario para obtener actividad amebistática positiva. Para las determinaciones iniciales se establecieron tiempos de exposición de 30 min, 1, 3, 6 y 24 h. Dado que la cepa ATCC permaneció viable a las 24 h frente al cloruro dodecildimetilamonio, se realizó una evaluación complementaria a las 36 h de exposición con el fin de determinar si dicha resistencia se mantenía con un mayor tiempo de exposición.
Un resumen de los pasos de procesamiento de este apartado se muestra en la Fig. 1.
Uso de herramientas de IA
Se utilizaron herramientas de inteligencia artificial generativa (ChatGPT o Claude, según utilidad de la Inteligencia) exclusivamente para la elaboración de figuras esquemáticas (Figs. 1, 2 y 3). El diseño conceptual, la interpretación de resultados y la redacción científica fueron realizados por las autoras. Las imágenes generadas fueron revisadas, validadas y aprobadas por las autoras antes de su inclusión en el presente trabajo, asegurando su correspondencia exacta con los procedimientos realizados.
RESULTADOS
Acción amebistática de las soluciones de cloro Ninguna de las concentraciones evaluadas (24, 36, 48 y 60 ppm) logró inhibir el crecimiento de la cepa ATCC (A) dentro del período de exposición de 24 h. La cepa ambiental (C) mostró el mismo comportamiento resistente frente a 24, 36 y 48 ppm, evidenciando actividad amebistática únicamente a 60 ppm a partir de las 3 h de exposición. La cepa hospitalaria (B) resultó la más susceptible: a 24 y 36 ppm el desarrollo se inhibió a las 5 h, a 48 ppm a las 2 h, y a 60 ppm a 1 h de exposición. Los resultados se resumen en la Fig. 2 (mapa de calor) y la Tabla 1.
Acción amebistática de la solución de cloruro dodecildimetilamonio al 1.6%
El detergente catiónico evidenció actividad amebistática en las tres cepas, aunque con diferencias en el tiempo de exposición requerido. La cepa hospitalaria (B) fue la más susceptible, con efecto amebistático a partir de 1 h; la cepa ambiental (C) lo evidenció a las 3 h. La cepa ATCC no evidenció actividad amebistática dentro de las primeras 24 h de exposición (Fig. 3, Tabla 1). Para esta última cepa se observó ausencia de crecimiento en ANN en la evaluación complementaria realizada a las 36 h.
| Compuesto / concentración | Cepa A (ATCC 30461) | Cepa B (hospitalaria) | Cepa C (ambiental) | Observación |
|---|---|---|---|---|
| Cloro (lavandina 55 g/l): tiempos mínimos de actividad amebistática | ||||
| 24 ppm | > 24 h | 5 h | > 24 h | Sin efecto en cepa ATCC y ambiental |
| 36 ppm | > 24 h | 5 h | > 24 h | Sin efecto adicional en ATCC y ambiental |
| 48 ppm | > 24 h | 2 h | > 24 h | Mayor eficacia solo en cepa hospitalaria |
| 60 ppm | > 24 h | 1 h | 3 h | Primera concentración efectiva para cepa ambiental |
| Cloruro dodecildimetilamonio al 1,6%: tiempo mínimo de actividad amebistática | ||||
| 1,6% | > 24 h | 1 h | 3 h | Eficaz en cepas B y C dentro de las 24 h; cepa ATCC requirió mayor tiempo de exposición |
DISCUSIÓN
Los resultados obtenidos demuestran que la sensibilidad de Acanthamoeba; spp. frente a los desinfectantes evaluados fue variable según la cepa y el compuesto utilizado, en concordancia con lo reportado previamente en la literatura (Burger et al. 1994; Khan, 2006; Osato et al., 1991). Es importante señalar que la actividad amebistática fue inferida a partir de la ausencia de crecimiento posterior en agar no nutritivo, criterio ampliamente utilizado en estudios experimentales con Acanthamoeba; spp. Sin embargo, no se realizaron ensayos específicos de viabilidad quística, por lo que no puede descartarse completamente la persistencia de quistes viables que no hayan logrado exquistar bajo las condiciones de cultivo empleadas.
Con referencia a la acción amebistática del cloro, la cepa de Acanthamoeba; aislada en el hospital (B) mostró mayor sensibilidad a la acción del cloro que la cepa ambiental (C) y la ATCC (A). No obstante, aun considerando la mayor susceptibilidad de esta cepa, las concentraciones necesarias para obtener efecto amebistático fueron elevadas y requirieron tiempos de exposición prolongados, lo que limita la utilidad práctica del cloro como desinfectante ambiental frente a Acanthamoeba; spp. en establecimientos sanitarios (Diego, 2023). Estos hallazgos son consistentes con los reportados por De Jonckheere et al. (1976) y Mogoa et al. (2010), quienes señalaron la baja efectividad de las soluciones cloradas frente a quistes de amebas de vida libre. El detergente catiónico cloruro dodecildimetilamonio al 1.6% mostró una eficacia amebistática notoriamente superior a la del cloro para las tres cepas evaluadas. La solución de trabajo del detergente al 1.6% es usada habitualmente en instituciones sanitarias para la desinfección de instrumental, aparatología, mesadas y camillas, etc. en tiempos variables de aplicación. Respecto a la cepa hospitalaria (B), los resultados mostraron que el efecto amebistático se logró transcurrida la hora de exposición al desinfectante, sin evidenciar crecimiento posterior en cultivo. La cepa ambiental (C) resultó más resistente, requiriendo 3 horas de exposición para evidenciar actividad amebistática. La cepa ATCC (A), si bien no evidenció inhibición dentro de las 24 horas, mostró actividadamebistática a las 36 horas de exposición, lo que indica que, a diferencia de lo observado con el cloro, el detergente catiónico logró efecto amebistático sobre las tres cepas, aunque con marcadas diferencias en los tiempos requeridos. Este hallazgo adquiere particular relevancia epidemiológica porque el cloruro dodecildimetilamonio al 1.6% es el desinfectante de uso rutinario en la institución de origen de la cepa B; sin embargo, los tiempos de exposición habituales en la práctica hospitalaria pueden ser insuficientes para garantizar la eliminación quística, especialmente frente a cepas más resistentes como la ATCC.
La diferencia en susceptibilidad entre las cepas merece una consideración particular. Un hallazgo especialmente relevante fue la mayor sensibilidad de la cepa hospitalaria (B) frente a ambos desinfectantes, en contraste con el comportamiento más resistente observado en la cepa ambiental (C) y en la cepa de referencia ATCC (A). Si bien los mecanismos responsables no fueron investigados en este estudio, esta diferencia podría estar relacionada con variaciones en la estructura de la pared del quiste entre cepas. Acanthamoeba; spp. forma quistes de doble pared — ectoquiste y endoquiste— cuya composición y espesor varían según la especie, el genotipo y las condiciones de enquistamiento (Turner et al., 2000). Cabe la posibilidad de que la cepa hospitalaria presente una pared quística estructuralmente más permeable a la acción de los biocidas evaluados, hipótesis que podría explorarse en estudios futuros mediante microscopía electrónica comparativa. Asimismo, dado que las cepas no fueron caracterizadas genéticamente (genotipos T1–T17), no puede descartarse que diferencias genotípicas, así como adaptaciones derivadas del ambiente de origen, también estén influyendo en los resultados de susceptibilidad observados. Estos hallazgos resaltan la necesidad de ampliar el número de aislamientos estudiados para comprender mejor la variabilidad de respuesta a los desinfectantes dentro del género Acanthamoeba.
Desde una perspectiva sanitaria, los resultados obtenidos ponen de manifiesto las limitaciones de las soluciones cloradas evaluadas como único agente de control de Acanthamoeba; spp. en ambientes hospitalarios y en humedales recreacionales, dada la alta resistencia observada especialmente en las cepas ATCC (A) y ambiental (C). Bajo las condiciones experimentales evaluadas, el cloruro dodecildimetilamonio mostró una actividad amebistática superior a la observada para las soluciones de cloro. Estos datos podrían contribuir a la revisión y diseño de los protocolos de desinfección institucional. La incorporación de estos protocolos debería contemplar no solo el agente biocida sino también el tiempo mínimo de exposición según el tipo de microorganismo presente.
Una limitación metodológica a considerar es la ausencia de un neutralizador específico para el cloruro dodecildimetilamonio previo a la siembra en agar no nutritivo. Debido a ello, no puede descartarse que un eventual arrastre del desinfectante hacia la placa de cultivo haya contribuido, al menos parcialmente, a la mayor actividad amebistática observada para este compuesto en comparación con el cloro, para el cual sí se utilizó tiosulfato como neutralizador. Estudios futuros deberán incorporar este neutralizador en el protocolo experimental a fin de confirmar la magnitud real del efecto amebistático del cloruro dodecildimetilamonio sobre quistes de Acanthamoeba spp.
CONCLUSIÓN
Las soluciones de cloro evaluadas (24–60 ppm) mostraron eficacia amebistática limitada frente a las tres cepas de Acanthamoeba spp. estudiadas. Si bien la cepa hospitalaria (B) resultó la más susceptible, las concentraciones necesarias para obtener inhibición fueron elevadas y los tiempos de exposición requeridos resultan difícilmente compatibles con las condiciones reales de desinfección hospitalaria. Estos hallazgos ponen de manifiesto las limitaciones de las soluciones de cloro evaluadas para el control de quistes de Acanthamoeba spp. bajo las condiciones experimentales analizadas.
El detergente catiónico cloruro dodecildimetilamonio al 1.6% demostró ser un agente con mayor actividad amebistática, con actividad evidenciada en las tres cepas, aunque con diferencias en el tiempo de exposición requerido: 1 hora para la cepa hospitalaria (B), 3 horas para la cepa ambiental (C) y 36 horas para la cepa ATCC (A). Los resultados sugieren que el cloruro dodecildimetilamonio constituye una alternativa potencialmente más eficaz que las soluciones de cloro para el control de quistes de Acanthamoeba spp. en entornos hospitalarios. No obstante, estos hallazgos deberán confirmarse mediante estudios que incluyan un mayor número de aislamientos y caracterización molecular de las cepas.
En conjunto, los datos obtenidos aportan evidencia concreta para la revisión de los protocolos de desinfección institucional y destacan la importancia de considerar a Acanthamoeba spp. como un microorganismo objetivo en las estrategias de vigilancia y control ambiental en instituciones sanitarias.
FINANCIAMIENTO
Este trabajo fue financiado con los fondos recibidos por la SECyT-UNS para el Proyecto de Grupo de Investigación PGI 24/B273 bajo la dirección de Viviana Randazzo.
CONFLICTO DE INTERESES
Las autoras no acreditan conflicto de intereses.
REFERENCIAS
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Recibido: 12 de junio de 2026. Aceptado: 10 de agosto de 2026.